本文描述了在HEK293细胞系中，使� 贝克曼库尔特＇�/span>Beckman Coulter（�/span>Biomek i3自动化工作站执行脂质体瞬时转�DOE＇�/span>Design of Experiments）的实验流程与结果、�/span>

实验重点在于通过自动化方式执行细胞铺板、转染体系制备、时间控制加样及混匀操作，以减少人为操作差异寸�/span>DOE结果的影响、�/span>

转染效果通过荧光显微成像叉�/span>Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞分析�?/span>进行评估、�/span>

实验结论仅基于观察数据，用于支持后续转染条件优化与工艺选择、�/span>

一、研究背�?/span>

细胞瞬时转染常用于基因表达分析、蛋白功能研究及相关生物学研究。在开展相关实验之前，通常需要通过DOE的方式对转染条件进行初步探索，包�DNA投加量与转染试剂用量范围等、�/span>

�?/span>DOE场景中，实验涉及多种变量与重复条件。手工操作在体积控制、时间控制及跨孔一致性方面存在一定难度、�/span>

为降低操作差异对DOE结果的影响，本实验采�贝克曼库尔特＇�/span>Beckman Coulter（�/span>Biomek i3桌面级自动化工作竘�/span>执行与转染相关的液体处理操作、�/span>

二、实验概�?/span>

1.使用平台与检测方弎�/span>

·自动化平台：Beckman Coulter Biomek i3

·成像检测：EVOS（明场与GFP（�/span>

·流式检测：Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞分析�?/span>

Biomek i3用于执行细胞铺板、转染体系制备、加样和混匀等步骤，检测环节独立完成、�/span>

三、实验中关注的主要问颗�/span>

1.实验变量较多

本实验中涉及的变量包括：

·细胞铺板密度

·DNA投加野�/span>

·转染试剂用量

·预混与加样的时间间隔

·加样位置与混匀方式

�?/span>DOE条件下，需要尽量减少非设计变量带来的影响、�/span>

2.转染步骤中的时间控制

在脂质体转染流程中，DNA与转染试剂混合后至加样的时间间隔可能对结果产生影响、�/span>

因此，本实验对该时间间隔进行统一控制，以提高不同条件之间的可比性、�/span>

四、实验流稊�/span>

1.细胞铺板

·细胞系：HEK293

·板型９�/span>96孔平底黑壁透底松�/span>

·接种密度�

o25,000 cells / 100μL

o50,000 cells / 100μL

铺板完成后，使用i3X MiniMax成像模块对细胞沉降和状态进行确认、�/span>

2.转染体系设置

根据试剂说明书，设置以下条件组合９�/span>

·DNA９�/span>100 ng vs 400 ng /孓�/span>

·Lipofectamine９�/span>0.15μL vs 0.3μL /孓�/span>

·P3000：按说明书比侊�/span>

·稀释体系：Opti-MEM

所有体系由Biomek i3�DOE布局制备、�/span>

国�span style="font-family: Calibri;">1９�span style="font-family: Calibri;">Biomek i3 DOE板布局

3.预混与加样控刵�/span>

·各预混体系通过程序错峰启动

·DNA/转染试剂预混至加样的时间统一�12分钟

·加样位置为液面下�1 mm

·加样后采用缓慢吹吸配合倾斜混匀

上述操作用于统一处理条件，不对转染机制作额外假设、�/span>

4.培养与检浊�/span>

·培养条件９�/span>37 �?/span>C＋�/span>5% CO₁�/span>

·成像９�/span>EVOS（明场与GFP，参数保持一致）

·流式分析９�/span>

使用Beckman Coulter CytoFLEX，采用标准门控流程完成定量分析、�/span>

国�/span>2９�/span>Biomek i3方法选项选择�?/span>MOS，支持轻松访问最常用皃�/span>DOE方法设置

五、实验结果（基于观察（�/span>

1.�400 ng DNA条件下，部分条件中观察到转染信号下降的情况、�/span>

该结果与细胞毒性相关的已有认知一致，但本实验未进一步探讨机制、�/span>

2.�25,000 cells接种密度条件下，0.15μL�0.3μL Lipofectamine在转染结果上未观察到明显差异、�/span>

该观察结果为后续条件筛选提供参考、�/span>

国�span style="font-family: Calibri;">3：在每孔细胞接种密度丹�span style="font-family: Calibri;">25000个细胞的四种预混体系条件下的典型荧光显微成像

国�span style="font-family: Calibri;">4：代表性的流式细胞术门控策略，从左上角顺时针：选择细胞、选择单线态细胞、将荧光门应用于阴性对照（仅限培养基）孔和将荧光门用于转染细胞孓�/span>

六、关亍�/span>Biomek i3在本实验中的作用说明

在本实验中，贝克曼库尔特Biomek i3主要用于９�/span>

·执行统一的液体处理操佛�/span>

·控制加样体积与时间间隓�/span>

·支持DOE条件的重复执衋�/span>

本实验结果用于评价转染条件本身，不用于比较自动化与手工操作在转染效率上的差异、�/span>

FAQ

Q1：本实验是否证明自动化可以提高转染效率？

否。本实验仅关注操作一致性对DOE数据可比性的影响，未比较效率高低、�/span>

Q2９�/span>Biomek i3在实验中解决了什么问题？

主要用于减少体积、时间和混匀方式上的人为差异、�/span>

Q3：是否必须搭�CytoFLEX使用＞�/span>

不是、�/span>CytoFLEX仅作为本实验的定量检测工具之一、�/span>

Q4：实验结果是否可以直接外推到其他细胞系？

不可以。不同细胞系需单独进行条件优化、�/span>

参考文�?/span>

应用说明《使�?/span>Biomek i3自动化工作站进行自动化细胞铺板和基于脂质体的瞬时转染实验设计＇�/span>DOE）《�/span>

Meta Title９�/span>Biomek i3自动化细胞转�DOE应用｜贝克曼库尔�Beckman Coulter

Meta Description：使用贝克曼库尔特（Beckman Coulter（�/span>Biomek i3自动化工作站，在HEK293细胞中执行脂质体瞬时转染DOE，通过统一铺板、加样和时间控制，减少操作差异，并结�CytoFLEX流式细胞分析用于转染条件评估、�/span>

Meta Keywords：贝克曼,贝克曼库尔特, Beckman Coulter, Biomek i3,自动化细胞转柒�/span>,细胞转染DOE,瞬时转染, HEK293转染,脂质体转柒�/span>,自动化液体处琅�/span>, CytoFLEX,流式细胞分析,实验设计DOE

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