简今�/strong>

反向柱层析法（Reverse Phase Column Chromatography, RPCC）是天然产物分离的重要手段之一，其核心作用是通过极性差异实现复杂混合物中目标成分的纯化，固定相为非极性（C18、C8 键合硅胶），流动相为极性溶剂（水、甲醇、乙腈等）。极性越弱的成分与固定相作用越强，洗脱越慢，从而实现分离、�/p>

本实验通过制备型快速柱层析技术将正相柱层析组分按照极性大小洗脱，流动相为甲醇、水，极性大的组分先被洗脱下来，极性小的组分后被洗脱下来，将洗脱下来的组分减压旋干称重，利用高效液相色谱查看分离效果、�/p>

实验

2.1 设备

• Buchi Pure C-810 纯化分离系统

• BUCHI Rotavapor R-300

• 真空恒温干燥箰�/p>

• 保干�?/p>

• 高效液相色谱

2.2 试剂及耗材

• 色谱� 4g

• 1mL 一次性塑料注射器

• 500mL 圆底烧瓶

• 研钵

• 试剂（分析纯（� 甲醇、水

2.3 样品和准备工佛�/strong>

样品：正相柱层析的组� G-12

� G-12 保干后称重得质量 m=2.5775g，将该组分全部溶于甲醇（分析级）后倒入研钵中，加入该组分质� 0.8 倍的 C-18 填料拌样，拌干后装入柱子中，又下至上按照 C-18 硅胶、样品、保护硅胶填满整根柱子、�/p>

2.4 实验过程

极性组分分离过程包括快速分离制备色谱柱的活化、极性组分的分离、浓缩和称重�?nbsp;

2.4.1 色谱柱的活化

取一支色谱柱 4g 安装� Pure C-810 上，连接好溶剂、管路， 按照�?参数平衡色谱柱，充分活化、�/p>

� 1：色谱柱平衡参数

� 2：极性组分分离参数及洗脱梯度

2.4.2 极性组分的收集与浓�?/strong>

� 500mL 收集瓶为收集容器外置在一侧，从洗脱开始收集洗脱液。如�?所示：

取干净� 500mL 圆底烧瓶烘干，根据色谱分离图谱将收集到的极性洗脱液转入烧瓶中，旋蒸除去溶剂，将样品转移至西林瓶中，按照相同步骤收集浓缩相应极性组分，将所有组分吹干后放入保干器中干燥24h后称重。实验进行过程中，通过紫外检测器我们可以观察到样品的出峰情况，可以根据此情况调整洗脱时间，尽可能的提高效率、�/p>

结果

3.1 G-12 的极性组分分离图谰�/strong>

3.2 G-12 极性组分含野�/strong>

各极性组分质量和� G-12 样品质量相比并未有太大差距，证明利用此法样品损耗量小、�/p>

3.3 分离效果高效液相色谱验证

将浓缩后的组分溶于适量色谱甲醇中，高效液相色谱分析条件� 20-95 甲醇 25min�?00甲醇 10min，分离效果如�?所示，结果表明各极性组分分离效果良好，并且将前 5min 的大峰单独分离出来后，后 20min 的小峰均显现出来，有助于分离单体化合物、�/p>

� 5：极性组分高效液相色谱图

结论

参考文�?/strong>

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