生物药涵盖激素、生长因子、细胞因子、抗体、蛋白酶、核酸、腺相关病毒及蛋白疫苗等，相关生物制品已成为治疗恶性肿瘤、自身免疫病、遗传性疾病、糖尿病及感染性疾病等的有力武器。随着生物药的进一步发展，其结构复杂性亦同步升级，给表征与质控带来前所未有的挑战、�/p>

0标记�?染色�?外标，原液直测，1 nm�? µm颗粒无处遁形：�/strong>

纯度、分子量、聚集、空壳、构象、相互作用——多维数据一次给齐、�/strong>

分析超速离心技术（AUC），作为诺奖级的经典方法，以第一性原理为基石，这一技术已成为2025版《中国药典》、CDE、FDA及USP相关通则系列技术指导原则共同推荐的分析方法，并持续为其他分析方法的开发提供指导、�/p>

AUC的构速�/p>

AUC技术：

提供了一种强大而通用且无标记的方法，广泛用于检测和表征各种生物大分子的关键物理属性。它能够直接、高分辨率地评估重组蛋白、抗体（包括裸抗、ADC）、AAV载体、肠道病毒、VLP疫苗、mRNA疫苗、多肽及小核酸药物在溶液中的真实状态，精确测定其粒径分布、聚集水平和空壳率等。尤其是在接近天然环境下提供样品的均一性、稳定性及构象信息方面，AUC展现出不可替代的优势，成为生物制药研发、生产和质量控制环节中不可或缺的关键分析工具、�/p>

一

AUC作为金标准用于抗体或重组蛋白表征及质�?/strong>

1 AUC——抗体与重组蛋白SEC方法开发的金标凅�/strong>

为确保SEC方法真正适配目标生物大分子，必须在开发阶段系统评估潜在误差：蛋白-填料相互作用、不可逆吸附、稀释解聚或重聚集等、�span style="color: rgb(255, 0, 0);">AUC作为行业公认的金标准，可在接近天然条件下对原始溶液直接离心检测，全程无固相基质干扰，完美弥补SEC在原理上的不足、�/strong>样品通过AUC检测后即可知道“标准答案”，根据“标准答案”进一步指导其他方法的开发、�/p>

AUC的优势在于：

1在样品原配方中完成原位分析，无需稀释、无填料吸附，能够一次性准确量化单体、二聚体及更高阶聚集体的真实比例，避免SEC等填料相互作用、�/p>

2其次，对于大尺寸聚集体，SEC填料可能产生显著吸附，回收率随进样次数递增，需多次“柱调节”才能稳定，而AUC可为SEC方法优化提供可靠基准、�/p>

3此外，当SEC分辨率不足、单体与聚集体共洗脱时，AUC可将二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体及更大聚集体逐一拆分，基线清晰，避免含量被高估或漏报，从而弥补SEC方法分辨率不足、�/p>

4最终，通过AUC的峰面积分布，可快速判断聚集体增长是由二聚体累积还是高阶聚集体激增主导，为工艺优化和稳定性研究提供精准依据、�/p>

简言之，AUC不仅为SEC方法建立“基准刻度”，更是抗体分子大小变异体分辨率与定量的核心工具、�/strong>关于AUC检测抗体方法学可参考《单抗药物分子大小变异体分析超速离心法的建立》文章、�/p>

AUC检测单抗结枛�/p>

2 AUC作为“金标准”用于ADC药物开叐�/strong>

与裸单抗相比，ADC因偶联疏水小分子毒素，结构更趋复杂，疏水性显著增强；药物-抗体比（DAR）越高，聚集倾向越大，且静电相互作用进一步加剧聚集风险。因此，在整个生命周期内精准监控ADC聚集体含量至关重要。传统SEC易受填料吸附、浓度稀释影响——研究发现，随着样品浓度升高，SEC检出聚体水平同步上升，表明定量失真。相比之下，AUC在原始配方缓冲液中原位检测，无需固相基质，聚体含量与理论值吻合，且不随浓度变化，有效规避SEC偏差、�/strong>国家药监局药品审评中心2023年《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》已将AUC列为ADC聚集体检测的正交金标准、�/p>

SEC检测ADC药物

AUC检测ADC药物

事�/strong>

病毒空壳率检测的金标凅�/strong>

腺相关病毒（AAV）作为体内基因治疗首选载体，其制剂中Empty、Partial、Full及Aggregates等各类颗粒并存，杂质与目标颗粒粒径差异微小，但直接影响药效与潜在免疫原性、�span style="color: rgb(255, 0, 0);">AUC凭借沉降系数的高分辨率，可高精度区分上述四种颗粒，并通过沉降系数值反推包装完整性，实现对AAV异质性的全景监控、�/strong>诺华全球首个获批的AAV基因疗法Zolgensma即采用AUC数据作为放行依据、�/p>

AUC检测结果示愎�/p>

Guidance Draft

丈�/strong>

用于溶瘤病毒产品杂质检浊�/strong>

溶瘤病毒杂质检测：空壳、聚集体与完整病毒等在粒径、分子量和电荷上仅有细微差别，常规方法分辨率低、定量偏差大。AUC以沉降系数为“指纹”，可精准区分各类颗粒疱疹病�?00 S�?00 S�?200 S，肠道病�?0 S�?20 S�?50 S，一次上机即可给出定量百分比、�span style="color: rgb(255, 0, 0);">AUC可为溶瘤病毒空壳率、聚集体杂质控制提供高分辨率、高可信度的解决方法、�/strong>

HSV AUC检测结果举侊�/p>

肠道病毒空壳率检浊�/p>

囚�/strong>

AUC用于疫苗检浊�/strong>

1VLP疫苗:

AUC通过沉降系数差异，可实时、定量监测HPV疫苗颗粒的组装效率与完整性，为工艺优化和放行提供高分辨率质控工具、�/p>

AUC检测HPV VLP疫苗颗粒

2mRNA疫苗:

AUC能够在一次运行中精准区分片段、单体RNA与各类聚集体，并对LNP颗粒大小分布进行高分辨率解析，从而同步识别LNP聚集体及定量测定包封率、�/p>

AUC对mRNA原液进行检浊�/p>

AUC对包封率进行检浊�/p>

AUC-FV检测LNP分布

3其他疫苗９�/strong>

亚单位疫苗、类毒素疫苗等其他疫苗同样可借助AUC对颗粒大小、聚集程度和构象一致性进行高灵敏度、原位检测，为质量放行与稳定性研究提供可靠数据支撑、�/p>

亓�/strong>

AUC用于多肽检浊�/strong>

分析超速离心法（AUC）凭借其卓越的高分辨率检测能力，已成为多肽药物聚集体检测领域的重要技术。国家药监局药品审评中心发布的《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则》正式将AUC列为推荐检测方法，也是美国药典通则<1503>的推荐方法，成为合成肽原料药质量属性中聚集体检测的重要手段、�!--1503-->

GLP-1 AUC检测结果举侊�/p>

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AUC用于小核酸药物检浊�/strong>

借助AUC技术，小核酸片段的检测变得精准而高效，能够清晰地区分出片段、目标产物以及聚集体。目前，包括Patisiran Sodium、Nusinersen Sodium、Givosiran Sodium和Inclisiran Sodium在内的小核酸药物的指导草案，均已将AUC列为推荐的理化性质分析方法、�/p>

AUC对小核酸原液检测结果举侊�/p>

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参考文�?/strong>

1. Wang D, Tai PWL, Gao G. Adeno-associated virus vector as a platform for gene therapy delivery. Nat Rev Drug Discov. 2019 May;18(5):358-3782. .Available from: Qin X, Yu Q, Li X, Jiang W, Shi X, Hou W, Zhang D, Cai Z, Bi H, Fan W, Ding Y, Yang Y, Dong B, Chen L, Huo D, Wang C, Zhou Y, Pei D, Ye M, Liang C. Methodological Validation of Sedimentation Velocity Analytical Ultracentrifugation Method for Adeno-Associated Virus and Collaborative Calibration of System Suitability Substance. Hum Gene Ther. 2024 Jun;35(11-12):401-411. doi: 10.1089/hum.2023.169. Epub 2024 Jun 11. PMID: 38717948.4. Yuan S, Wang J, Zhu D, Wang N, Gao Q, Chen W, Tang H, Wang J, Zhang X, Liu H, Rao Z,