应用
目的:本研究采用靶向CD147的单克隆抗体对纳米基因载体颗粒进行靶向修饰后,进行针对肺癌细胞的蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)小干扰RNA基因治疗,观察其对肺癌细胞增殖和迁移能力的抑制效果。方法:制作可靶向CD147蛋白的磁性纳米基因载体。激光扫描共聚焦显微镜观察肺癌细胞CD147表达量。分别设立CP组、CN组和LP组复合物,按每6孔板孔质粒总量250 ng进行细胞转染。另设CD147靶向载体对照CA组和未转染细胞的对照(control)组。激光扫描共聚焦显微镜观察纳米造影剂的细胞内吞效果。实时荧光定量PCR检测PKCε的mRNA表达。Western blot法检测PKCε、Ki67、MMP3、Wnt1和GAPDH的蛋白表达。平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力。Transwell法检测细胞的迁移能力。结果:免疫荧光法染色观察证?人肺癌A549细胞的胞膜高表达CD147蛋白。CP组细胞中siRNA高效进入A549细胞,质粒内吞效率大于CN组和LP组。CP组、CN组、LP组和CA组的A549细胞中PKCε的mRNA相对表达量分别为control组的?.76±0.18?、(98.51±0.32?、(99.17±0.16?和(99.68±0.11?,CP组与control组间的差异有统计学显著性(P?.05?CN组、LP组与control组间的差异无统计学显著性。CP组PKCε、Ki-67、MMP3及Wnt1蛋白的表达量明显降低,CN组和LP组与对照组之间的蛋白表达量的差异无统计学显著性。CP组的克隆形成数量明显少于control?差异具有统计学显著性(P?.05)。CN组、LP组和CA组的有效克隆数量与control组相比差异没有统计学显著性。CP组的过膜细胞数量明显少于control?差异具有统计学显著性(P?.05)。CN组、LP组和CA组的数量与control组相比差异没有统计学显著性。结论:靶向CD147修饰的纳米基因载?可以对肺癌细胞进行高效的PKCε-siRNA基因治疗,实现对肺癌细胞增殖和迁移能力的高效抑制?..

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2017-10-19

应用
目的 :探讨直? nm的小尺寸金纳米颗粒(gold nanoparticles,GNPs)对大鼠皮质神经元细胞的作用及相关机制。方法:使用硼氢化钠还原法制备GNPs,用透射电镜(TEM)及紫外-可见光光谱(UV-Vis)进行鉴定。用5%牛血清白蛋白(BSA)对GNPs进行包裹提纯后制备成不同浓度?00? 200? 400μg/L)的GNPs培养液。采用免疫荧光染色鉴定原代培养的大鼠皮质神经元纯度。体外培养原代大鼠皮质神经元72 h?以正常培养的神经元为对照?以不同浓度GNPs溶液孵育48 h后的神经元作为实验组。采用TEM观察GNPs在细胞内的分市采用CCK-8试剂盒检测细胞活劚采用TUNEL法检测细胞凋亠采用丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测氧化应激水平。结果:TEM及UV-Vis显示硼氢化钠还原法制备的GNPs呈尺寸均一的球?在溶液中均匀分散。原代培养的大鼠皮质神经元纯度为?2.0±2.3?。GNPs主要以聚合体形式分布于胞浆、溶酶体、囊泡中。随着GNPs浓度的增?细胞活性逐渐降低,尤其1 200? 400μg/L处理组细胞活力较对照组显著降低(P?.05)。TUNEL染色结果显示,随着GNPs浓度的增?凋亡细胞数逐渐增加,1 200? 400μg/L处理组细胞凋亡明?具有显著性差异(P?.05)。随着GNPs浓度的增?细胞内MDA含量逐渐增加,SOD含量逐渐减少,1 200? 400μg/L处理组与对照组相比MDA含量显著升高,SOD含量显著降低(P?.05)。结论:5 nm GNPs能降低大鼠皮质神经元的细胞活?促进其凋?其机制可能与氧化应激损伤相关?..

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2017-10-16

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